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产品概述

DAB,即3,3N-Diaminobenzidine Tertrahydrochloride,是辣根过氧化物酶(HRP)的常用底物 , 在 HRP 的催化下,DAB会产生棕色沉淀。该棕色沉淀不溶于水和乙醇,因此在DAB显色后,还可以使用溶于乙醇的染料进行后续染色。 本试剂盒可以用于细胞或组织在免疫组化或原位杂交时结合的 HRP 显色,也可用于Western等结合有 HRP 的膜的显色检测。同时也可以用于细胞或组织内源性的HRP 显色。


操作流程

1. 对于组织切片或蛋白质印迹膜,在与 HRP 标记的抗体或其它形式的探针孵育后,用适当洗涤液洗涤3-5次,每次3-5min。

2. 取 900μlPBS , 加入50μl DAB 显色液 A 和 50μl DAB 显色液 B 混合均匀,即配成 DAB 工作 液。如需要更大体积工作液,可按比例放大。此溶液必须现配现用,配好后避光保存,1 h 内使 用,过期后请将剩余的液体废弃。

3. 向组织切片或印迹膜上加入适量 DAB 工作液,确保能充分覆盖样品。

4. 室温避光孵育3-10min或更长时间,避免光照,直至显色至预期深浅。

5. 去除 DAB 染色工作液体 , 用蒸馏水洗涤2-3次即可终止显色反应。

6. 对于组织切片或细胞样品,显色反应终止后,可对其进行其他染色复染。对于膜,显色反应终止后,可以室温晾干避光保存。

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