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产品概述

本试剂盒是用于提取革兰氏阴性细菌基因组DNA的小量纯化试剂盒。试剂盒采用了独特的细胞裂解系统,由细胞裂解液裂解细胞释放基因组DNA , 再结合DNA制备膜技术纯化基因组DNA。本试剂盒具有高效、快速、方便之特点,提取操作仅需20min便可完成。使用本试剂盒可从1.0-5.0E+09的革兰氏阴性细菌中纯化得到多至数十微克的高纯度基因组DNA , 提取得到的基因组DNA可用于PCR反应、Southern杂交以及RAPD、AFLP、RFLP等多种分子生物学实验。


操作流程

实验前的准备
1. 准备56°C水浴。
2. 溶液GL若出现沉淀,请于65°C加热溶解,待恢复至室温后使用。
3. 漂洗液WB在首次使用前,请添加56ml的100%乙醇,混合均匀。
4. 洗脱结合于DNA制备膜上的基因组DNA时,将洗脱液或灭菌蒸馏水加热至65°C使用会提高基因组DNA的洗脱效率。
操作步骤
1. 用1.5ml离心管收集1.0-5.0E+09的细胞 , 12000rpm离心2min,弃上清(细胞培养液)。
2. 加入180µl的溶液GL、20µl的Proteinase K 和10µl的RNase A,充分吸打混匀 , 于56°C水浴温浴10min。
3. 加入200µl的溶液GB和200µl100%乙醇,充分吸打混匀。
4. 将吸附柱安置于收集管上 , 溶液移至吸附柱中 , 12000rpm离心2min,弃滤液。
5. 将500µl的漂洗液WA加入至吸附柱中,12000rpm离心1min,弃滤液。
6. 将700µl的漂洗液WB加入至吸附柱中,12000rpm离心1min,弃滤液。(注:请确认漂洗液WB中已经加入指定体积 的100%乙醇。请沿吸附柱管壁四周加入漂洗液WB , 这样有助于完全冲洗沾附于管壁上的盐分。)
7. 重复操作步骤6。
8. 将吸附柱安置于收集管上,12000rpm离心2min。
9. 将吸附柱安置于新的1.5ml的离心管上,在吸附柱膜的中央处加入50-200µl的灭菌水或洗脱缓冲液EB,室温静置 5min。(注:将灭菌蒸馏水或洗脱缓冲液EB加热至65°C使用时有利于提高洗脱效率。)
10. 12000rpm离心2min洗脱DNA,如需获得更大收量可将离下液重新加入吸附柱膜的中央或再加入50-200µl的灭菌水或洗脱缓冲液EB,室温静置5min后12000rpm离心2min洗脱DNA。
11. 基因组DNA定量。提取到的基因组DNA可通过电泳或吸光度测定以定量。

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