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产品概述

全蛋白提取试剂盒(Whole Cell Lysis Assay)可用于从哺乳动物组织和细胞中提取全蛋白,用含有蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液Lysis Buffer匀浆裂解组织或细胞,提取过程简便高效。获得的全蛋白可用于Western Blot、IP等后续研究,但不能用于蛋白激酶及磷酸酶免疫共沉淀的研究。


操作流程

细胞蛋白提取
1、贴壁细胞:用预冷的1× PBS洗2-3次, 以洗去培养液。
2. 悬浮细胞:将细胞及培养液移至预冷的离心管中,离心10min(1000rpm)后,弃上清。

3. 将预冷的Lysis Buffer按每1ml加入10μl PMSF的比例混匀备用,Lysis Buffer加入量参考下表。

4. 用细胞刮(沉淀振荡)充分破碎细胞,将其倒入离心管中超声;如果没有超声仪,冰上裂解 30min。
5.12000rpm,4℃离心 , 10min,上清为全蛋白提取物,可进行蛋白定量。
6. 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
Ⅱ组织蛋白的提取
1. 取新鲜组织 , 用预冷的1xPBS洗2-3次。
2. 将组织剪成小块 , 放入预冷的研钵中 , 倒入液氮充分研碎。
3. 将预冷的Lysis Buffer 按每1ml 加入10μlPMSF的比例混匀备用。
4. 每100mg组织应加入0.5-1ml Lysis Buffer,充分研磨。如果粘度过大则再需加入一定量Lysis Buffer再次研磨,之后进行超声。
5.12000rpm,4℃离心 , 10min,上清为全蛋白提取物,可进行蛋白定量。
6. 分装保存于-70℃,避免反复冻融。

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