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产品概述

还原型谷胱甘肽( GSH)是一种低分子自由基清除剂,它可清除O2- 、H2O2、LOOH。还原型谷胱甘肽是蛋氨酸、甘氨酸 和半胱氨酸组成的一种小分子肽,是组织中主要的非蛋白质的巯基化合物, 并且是GPX和GST两种酶类的底物,为这二 种酶分解氢过氧化物所必需,并且能稳定含巯基的酶和防止血红蛋白及其它辅因子受氧化损伤。 本试剂盒测定原理 : 二硫代二硝基苯甲酸与巯基化合物反应时能产生一种黄色化合物 , 可进行测定。 本试剂盒可测动物血清、血浆、组织以及全血、红细胞、培养细胞及培养液中的GSH的含量.


操作流程

1. 试剂配制。
试剂一 : 先向甲粉试剂中加入90-100°C的热双蒸水加入17ml,充分完全溶解。然后将已配好的甲液与乙液充分混合。此为过饱和溶液,室温静置冷却后,如有结晶,则取上清进行实验,室温保存6个月。
试剂二:用时加双蒸水20ml, 充分完全溶解,室温保存6个月。
试剂三:用时加双蒸水至50ml溶解,避光4°C保存6个月。
GSH标准品溶剂应用液:按GSH标准品溶剂贮备液:双蒸水=1 : 9 , 加入9倍体积的双蒸水进行稀释,现用现配。
10mmol/L GSH标准品溶液的配制:GSH的分子量为307,每次测定前将10mg的GSH标准品加入到3.25ml的 GSH标准品溶剂应用液中,混匀,现用现配。
20µmol/L GSH标准品溶液:取10mmol/L GSH标准品溶液0.02ml加入GSH标准品溶剂应用液9.98ml,现用现配。
2. 样本前处理。
a. 全血、血清(浆):取血清(浆)或10倍溶血液0.05ml,加试剂一0.2ml混匀,3500rpm离心10min,取上清液 待测。
b. 细胞、组织:取匀浆上清液0.1ml,加0.1ml试剂一混匀,3500rpm离心10min,取上清液待测

3、显色反应

注:请在5min内完成OD值测定,以减少误差,提高精确度
4. 计算。
全血GSH含量(μmol/L)=(测定OD值 - 空白OD值)/(标准OD值 - 空白OD值)x标准管浓度(20μmol/L)x 样本前处理稀释倍数(5倍)x样本测试前
稀释倍数(10倍)
细胞及组织GSH含量(μmol/gprot)=(测定OD值 - 空白OD值)/(标准OD值 - 空白OD值)x标准管浓度(20μmol/L)x 样本前处理稀释倍数(2倍)÷待测匀浆蛋白浓度(gprot/L)
血清(浆)GSH含量(μmol/L)=(测定OD值 - 空白OD值)/(标准OD值 - 空白OD值)x标准管浓度(20μmol/L)x 样本前处理稀释倍数(5倍)

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