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产品概述

还原型谷胱甘肽( GSH)是一种低分子自由基清除剂,它可清除O2- 、H2O2、LOOH。还原型谷胱甘肽是蛋氨酸、甘氨酸 和半胱氨酸组成的一种小分子肽,是组织中主要的非蛋白质的巯基化合物, 并且是GPX和GST两种酶类的底物,为这二 种酶分解氢过氧化物所必需,并且能稳定含巯基的酶和防止血红蛋白及其它辅因子受氧化损伤。 本试剂盒测定原理 : 二硫代二硝基苯甲酸与巯基化合物反应时能产生一种黄色化合物 , 可进行比色定量测定。 本试剂盒可测动物血清、血浆、组织以及全血、红细胞、培养细胞及培养液中的GSH的含量。


操作流程

1. 试剂配制。
试剂一 : 先向甲粉试剂中加入90-100°C的热双蒸水(50T 加入85ml;100T 加入170ml),充分完全溶解。然后将 已配好的甲液与乙液充分混合。此为过饱和溶液,室温静置冷却后,如有结晶,则取上清进行实验,室温保存6个月。
试剂二:用时加如双蒸水(50T加入100ml;100T加入200ml), 充分完全溶解,室温保存6个月。
试剂三:用时加双蒸水至50ml溶解,避光4°C保存6个月。
试剂四:用时每支加双蒸水10ml溶解,避光4°C保存。
GSH标准品溶剂应用液:按GSH标准品溶剂贮备液:双蒸水=1 : 9 , 加入9倍体积的双蒸水进行稀释,现用现配。
10mmol/L GSH标准品溶液的配制:GSH的分子量为307,每次测定前将10mg的GSH标准品加入到3.25ml的 GSH标准品溶剂应用液中,混匀,现用现配。
20µmol/L GSH标准品溶液:取10mmol/L GSH标准品溶液0.02ml加入GSH标准品溶剂应用液9.98ml,现用现配。
2. 样本前处理。
a. 全血:取0.1ml肝素抗凝全血加双蒸水0.9ml,充分混匀,直至透亮为止。
b. 血清(浆):直接取原液进行检测。
c. 组织:准确称取组织重量,按重量(g):体积(ml)=1 : 9的比例,加入9倍体积的生理盐水,冰水浴条件下机械匀浆,2500rpm离心10min,取上清液进行测定。
3. 上清液的制备:取待测样本0.5ml,加试剂一应用液2ml混匀,3500-4000rpm离心10min,取上清液1ml进行显色反应。

4. 显色反应。

注:请在5min内完成OD值测定,以减少误差提高精确度。
5. 计算。
全血,血清(浆)中GSH含量(gGSH/L)= (测定OD值 - 空白OD值)/(标准OD值 - 空白OD值)x标准品浓度(20×10-6mol/l)×GSH分子量 (307) x样本测试前稀释倍数
2. 组织样本中GSH含量计算公式:
组织中GSH含量(gGSH/gprot)=( 测定OD值 - 空白OD值) /(标准OD值 - 空白OD值)x标准品浓度(20×10-6mol/l) ×GSH分子量 (307)x样本测试前稀释倍数÷待测匀浆蛋白浓度(gprot/L)

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