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产品概述

乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase , LDH)是一种稳定的蛋白质,存在于正常细胞的胞质中,一旦细胞膜受损 , LDH即被释放到细胞外,通过检测细胞培养上清中LDH活性,可判断细胞受损程度,在一些应用中,比如药物筛选时,需要进行特定物质细胞毒性检测。LDH能催化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸与2,4-二硝基苯肼反应生成丙酮酸2, 4-二硝基苯腙 , 在碱性溶液中呈棕红色 , 通过比色可求出酶活力。 本试剂盒可测各种组织、血清(浆)及培养细胞、培养上清液、脑脊液等样本中LDH活性。


操作流程

1. 试剂配制 :
(1)辅酶Ⅰ应用液的配制:每支粉剂加1.3ml双蒸水溶解,溶解后即为10x辅酶Ⅰ储备液,如需多次使用建议分装冷冻,防止反复冻融。测定时将10x辅酶Ⅰ储备液用双蒸水10倍稀释 , 用多少配多少 , 现用现配。
(2)0.4mol/L NaOH 溶液配制 : 将4mol/L NaOH 溶液用双蒸水10倍稀释 , 用多少配多少 , 现用现配。

2. 操作表:

注(1)参考取样量:0.2%小鼠脑组织匀浆取10-50μl,大鼠血清取10-30μl。若样本中LDH酶活力太大,可将样本用生理盐水稀释后再测。
注(2)测定空白管中不加辅酶Ⅰ应用液。
注(3)严格按照说明书操作,不可先加辅酶Ⅰ再加基质液。
3. 计算公式:
(1)血清(浆)LDH计算公式:
单位定义:1000ml 血清(浆)37℃与基质作用15min,在反应体系中产生1μmol丙酮酸为1单位。

(2)组织LDH活力计算公式:
单位定义:每克组织蛋白37℃与基质作用15min,在反应体系中产生1μmol丙酮酸为1单位。



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