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产品概述

BCA蛋白定量方法是基于双缩脲反应,在碱性溶液中蛋白将Cu2+ 还原成Cu1+ ,而根据检测到的单价Cu离子的浓度可以检测体系中对应蛋白的量。BCA是一种显色剂,可以螯合被还原的Cu离子, 产生一种在562nm有强吸收的紫色复合物。此试剂盒准确度高,在50-2000µg/ml浓度范围内有很好的线性关系。兼容性好,能与各种化学试剂和表面活性剂兼容,但有些化学成分如螯合剂、 强酸、强碱和还原剂等,可能会干扰BCA法采用的还原及螯合定量过程。此试剂盒可检测的蛋白浓度最低为25µg/ml,最少蛋白量为0.5µg,待测样本体积为1-20µl。


操作流程

1. 配制工作液:根据标准品和样品数量,按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量 BCA工作液,充分混匀。
2. 稀释标准品:取10µl标准品稀释到100µl,使终浓度为0.5mg/ml。将标准品按0、1、2、4、 8、12、16、20µl加到96孔板的蛋白标准品孔中,再用PBS补足至20µl。
3. 加适当体积样品到96孔板的样品孔中,再用PBS溶液补足至20µl。
4 .向各孔加入200µlBCA工作液,37℃放置30min(也可以室温放置2h)。用BCA法测定蛋白浓度时,吸光值会随着反应时间的延长而不断增加,且显色反应会因温度升高而加快。如果蛋白样品浓度较低,则适宜在较高的温度下孵育,或延长孵育的时间。
5 .用酶标仪测定A562,根据标准曲线计算出蛋白浓度。

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