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产品概述

      碱性磷酸酶ALP几乎存在于身体各种组织中,是膜结合酶。肠上皮、肾小管、成骨细胞、肝脏、胎盘及白细胞中尤其丰富。血清中ALP主要来源于肝和骨。ALP与肠内脂质转移及骨质钙化有关。血清ALP测定对肝胆系统及骨骼系统疾病的研究有参考意义。

      碱性磷酸酶分解磷酸苯二钠,产生游离酚和磷酸,酚在碱性溶液中与4-氨基安替吡啉作用经铁氰化钾氧化生成红色醌衍生物,根据红色深浅可以测定酶活力的高低。

      本试剂盒可测动物血清(浆)、组织、各种体液、灌流液、各种培养细胞以及细胞培养上清液等。


操作流程

一、样本前处理:
1. 血清(浆):可直接取样用于测定(个别含量过高的样本需要稀释后测定,如鸡血清(浆)中ALP活力较高,一般需要用生理盐水5倍或10倍稀释后待测)。
2. 组织:准确称取待测组织的重量,按重量(g):体积(ml)=1:9的比例,加入9倍体积的生理盐水进行匀浆,2500rpm,离心10min,取上清液进行测定。
3. 细胞培养液:吸取细胞培养液,1000-1500rpm,离心10min,取上清液进行测定。
4. 培养细胞:
a. 培养细胞的收集:
悬浮培养细胞:可直接通过离心收集沉淀细胞(1000rpm,离心10min,弃上清留沉淀细胞)。
贴壁培养的细胞:吸去上清,可通过细胞刮直接将细胞刮下,然后1000rpm,离心10min弃上清, 留沉淀细胞,再加入1mlPBS轻轻吹打,再次1000rpm,离心10min弃上清,留沉淀细胞待用。
b. 培养细胞的破碎:在细胞沉淀中加入一定量(10 8 的细胞一般加0.3-0.5ml)的缓冲液(缓冲液可以用 PBS或者是生理盐水),需保证超声探头在液面以下。功率300W,冰水浴,每3-5s超声一次,间隔4次 (每次间隔时间为30s左右)。

二、血清(浆)中ALP的测定,如下操作表:

图片.png

细胞(培养上清)中ALP的测定,如下操作表:

图片.png

三、计算公式:
1. 血清(浆)中ALP活力计算公式:
单位定义:100ml 血清在37℃与基质作用15min产生1mg酚为1个金氏单位。
血清中ALP活力(金氏单位/100ml)= (测定OD值 - 空白OD值)/(标准OD值 - 空白OD值)x酚标准品浓度(0.1mg/ml)x 100mlx 样本测定前稀释倍数
2. 组织样本中ALP活力计算公式:
单位定义:每克组织蛋白在37℃与基质作用15min产生1mg酚为1个金氏单位。
组织中ALP活力(金氏单位/gprot)= (测定OD值 - 空白OD值)/(标准OD值 - 空白OD值)x 酚标准品浓度(0.1mg/ml)÷待测样本蛋白浓度(gprot/ml)
3、培养液中ALP活力计算公式:
单位定义:100ml 血清在37℃与基质作用15min产生1mg酚为1个金氏单位。
培养液中ALP活力(金氏单位/100ml)= (测定OD值 - 空白OD值)/(标准OD值 - 空白OD值)x酚标准品浓度(0.02mg/ml)x 100mlx 样本测定前稀释倍数
4、培养细胞中ALP活力计算公式:
单位定义:每克组织蛋白在37℃与基质作用15min产生1mg酚为1个金氏单位。
培养细胞中ALP活力(金氏单位/gprot)= (测定OD值 - 空白OD值)/(标准OD值 - 空白OD值)x 酚标准品浓度(0.02mg/ml)÷待测样本蛋白浓度(gprot/ml)

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