好评率
100%

产品概述

高纯质粒小量制备试剂盒(Plasmid Mini Preparation Kit)是一种用于从大肠杆菌中进行小量质粒的快速抽提的试剂盒。本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞,离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低PH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA,再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其他细菌成分去除,最后低盐、高PH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。 本试剂盒快速,方便,无需使用有毒的苯酚、氯仿等试剂,也无需酒精沉淀,获得的质粒产量高,纯度好,可以直接用于酶切、转化、 PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。


操作流程

1. 取1-5ml过夜培养的菌液,12000rpm离心30s,弃上清,收集菌体,尽可能的倒干上清。处理超过1ml菌液可以离心弃上清 后,在同一个管内加入更多的菌液,重复步骤1,直到收集足够的菌体。
2. 用250µl溶液P1重悬菌体沉淀,涡旋振荡至彻底悬浮。如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解,导致提取量和纯度偏低。
3. 加250µl溶液P2,温和地上下翻转6-10次使菌体充分裂解,直到溶液变得清亮。温和地混合,不要剧烈振荡,以免基因组 DNA剪切断裂!所用时不应超过5min!以免质粒受到破坏。此时菌液应变得清亮粘稠,如果菌体少,很快清亮粘稠后就可以做下一步。
4. 加350µl溶液P3,立即温和地上下翻转6-10次,室温放置5min。室温12000rpm离心15min,小心取上清。
5. 将吸附柱安置于收集管上,将上一步所得上清液加入吸附柱AC中(吸附柱放入收集管中,溶液太多可分两次加入), 12000rpm离心1min,弃滤液。
6. 加入500µl去蛋白液PE,12000rpm离心30-60s,弃滤液。此步骤为了去除痕量核酸酶等杂质,如所用菌株为JM系列、 HB101等endA菌株或野生型菌株,核酸酶含量丰富,应加此步骤;如所用菌株为XL-1 Blue和DH5α等缺陷性菌株,核酸酶含量低,则可略过此步骤。
7. 加入700µl漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心30-60s,弃滤液。
8. 重复步骤7一次,12000rpm离心30-60s,弃滤液。
9. 空柱12000rpm离心2min,室温放置3-5min,除去残留乙醇。
10. 取出吸附柱AC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加60-100µl洗脱缓冲液EB,室温放置1min,12000 rpm 离 心1min洗脱DNA,可立即用于下游分子生物学实验或-20℃保存。洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果需要质粒浓度较高,可以 适当减少洗脱体积,但是最小体积不应少于50µl,体积过小降低质粒洗脱效率,减少质粒产量。

湖北快3投注平台 河北快三平台 河北快三平台 湖北快3平台 河北快三 广西快三 河北快三app下载 pc蛋蛋开户 湖北快3 河北快三平台
0

服务热线

400-602-0407

App下载
关注公众号