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产品概述

大肠杆菌经过处理后可以摄取外源DNA(Plasmid DNA、Phage DNA等),处于这种状态的细胞称为感受 态细胞(Competent Cell)。在基因工程试验中,经常要使用各种感受态细胞进行DNA的转化操作。 使用本试剂盒制备的感受态细胞可以满足大多数实验的需要,并且适用于几乎所有常用的大肠杆菌,例如:E.coli DH5α、JM109、CJ236、HB101、MV1184、BMH71-18mutS等 , 转 化 效 率 均 可 以 达 到1×10 6  cfu/μg pUC19以上(转化效率根据大肠杆菌细胞系及转化用DNA不同稍有差异)。使用本试剂盒制备的感 受态细胞可以在-70℃保存一年。


操作流程

1. 取-70℃冰冻菌种,用划线法接种细菌于培养皿,做好标记,于37℃培养过夜。
2. 第二天,从平板上挑取单个菌落,接种至含有3mlLB培养液的试管中,37℃,175rpm振荡培养过夜。次 日取菌液1ml接种至含有100mlLB培养基的500ml烧瓶中,37℃剧烈震荡培养约2.5h左右(200r/min)。
3. 当菌落OD600值达到0.3-0.5时,将烧瓶取出放置冰上10-15min。在无菌条件下把菌液倒入50ml离心管 中。4℃,4000rpm离心5min。
4. 弃上清,将离心管倒置于干滤纸上1min,吸干残留的培养液。加10ml 预冷的感受态制备试剂A到离心管 中,轻轻吹打,悬浮菌体,冰浴30min。
5. 4℃,4000rpm离心5min,弃上清,将离心管倒置于干滤纸上1min,吸干残留的培养液。加4ml预冷的 感受态制备试剂B,重悬浮菌体。每管0.2ml分装,至4℃保存备用,24-48h内使用效果较好。如果暂时不 用,可再保存于-70℃的低温冰箱中。

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