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产品概述

CCK-8细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(Cell Counting Kit-8 (CCK-8))是一种基于四唑盐 WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。WST-8是一种类似于 MTT的化合物,在电子耦合剂1-Methoxy PMS存在的情况下,可以被还原生成橙黄色水溶性的 甲臜(Formazan)。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。 本试剂盒提供的CCK-8溶液不需配制,可以直接加入到细胞样品中,对细胞无毒性并且相当稳定,因此可以长时间孵育。另外 , 本方法产生的Formazan 是水溶性的 , 不仅省去了溶解步骤 , 更减少了误差。


操作流程

1. 在96孔板中接种细胞悬浮液(100μl/孔),通常细胞增殖实验每孔约2000个细胞,细胞毒性 实验每孔约5000个细胞,具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小、细胞增殖速度的快 慢等因素决定。

2. 根据实验需要确定特定的药物刺激浓度以及时间。

3. 药物处理细胞后,每孔加入10μlCCK-8溶液。如果起始的培养条件体积为200μl,则需加入 20μlCCK-8溶液,以此类推。可以用加相应量细胞培养基和CCK-8但不加细胞的孔作为空白对 照,若担心所使用的药物会干扰检测,需设置加相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液但不加细 胞的孔作为空白对照。

4. 在细胞培养箱内继续孵育1-4h , 具体时间可以通过预实验确定。预实验时可以在0.5、1、2和 4h后分别用酶标仪检测,然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续试验。

5. 用酶标仪测定在450nm处的吸光值。若无450nm滤光片,可以使用420-480nm的滤光片。

6. 活力计算: *细胞活力(%)=[A(加药)-A(空白)]/[A(0加药)-A(空白)] ×100 A(加药):具有细胞、CCK-8溶液和药物溶液的孔的吸光度。 A(空白):具有培养基和CCK-8溶液而没有细胞的孔的吸光度。 A(0加药):具有细胞、CCK-8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度。 *细胞活力:细胞增殖活力或细胞毒性活力。

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