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产品概述

碘化丙锭( Propidium Iodide , PI)可以与细胞内 DNA 和 RNA 结合 , 采用 RNA 抑制剂将 RNA 消化后 , 通过流式细胞术检测到的与 DNA 结合的 PI 的荧光强度直接反映了细胞内 DNA 含量的多少。由于细胞周期各时相的 DNA 含量不同 , 通常正常细胞的 G1/G0 期具有二倍体细胞的 DNA 含量(2N), 而 G2/M 期具有四倍体细胞的 DNA 含量(4N), 而 S 期的 DNA 含量介于二倍体和四倍体之间。因此 , 通过流式细胞术 PI 染色法对细胞内 DNA 含量进行检测时 , 可以将细胞周期各时相区分为G1/G0 期 , S 期和 G2/M 期 , 并可通过特殊软件计算各时相的百分率。

PI 不能通过细胞膜完整的细胞(如活细胞和早期凋亡细胞), 在标本制备时 , 必须先用乙醇或其他破膜剂增强细胞膜的通透性 , 才能使 PI 进入细胞内与细胞内的核酸结合。乙醇通常是终浓度为 70% 的冷乙醇。

本试剂盒可用于贴壁细胞或悬浮细胞的细胞周期检测。


操作流程

1. 细胞样品的收集。用胰酶消化细胞,将消化好的细胞收集至离心管内,1000xg , 5min ,沉淀细胞。

2. PBS重悬细胞并调整细胞浓度为1×106 /ml, 1000xg,5min ,沉淀细胞.

3. 加入1ml 70%的冷乙醇固定2h至过夜,染色前用预冷的PBS洗去固定液.

4. 加入100μl RNase A , 37℃水浴30min.

5. 加入500μl Propidium Iodide 染色液混匀,4℃避光30min.

6. 用流式仪检测分析 记录激发波长488nm处红色荧光。

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