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产品概述

Annexin V是一种分子量为35kDa的Ca 2+依赖性磷脂结合蛋白,能够特异性结合磷酯酰丝氨酸(Phosphatidylserine, PS)。磷酯酰丝氨酸主要分布在细胞膜内侧,当细胞发生凋亡时,细胞会把磷酯酰丝氨酸外翻到细胞表面,即细胞膜外侧。DyeLight 650标记的Annexin V探针,即Annexin V-Light  650,能够特异性的结合这些外翻的磷酯酰丝氨酸,通过流式细胞仪或荧光显微镜非常简单而直接地检测到细胞发生凋亡的情况。

碘化丙啶(Propidium Iodide, PI),是一种核酸染料,它不能通过正常细胞膜,当细胞处于坏死或凋亡中晚期状态下,细胞丧失膜完整性,碘化丙啶进入细胞内部,与细胞核内的核酸发生结合,通过流式细胞仪或荧光显微镜检测,反映细胞膜完整状态的信息。故将Annexin V-Light  650与PI联合使用,将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。


操作流程

对于流式细胞仪检测:

1.悬浮细胞直接离心(1500rpm,5min)收集;贴壁细胞用胰蛋白酶(可含EDTA)消化,消化时间不宜过长,加入完全培养基终止反应;

2.PBS漂洗细胞两次,并进行细胞计数,离心(1500rpm,5min)收集1-5×10 5个细胞;

3.加入500μl Binding buffer重悬细胞;

4.加入5μl Annexin V-Light  650混匀后,加入10μl Propidium Iodide混匀,室温避光反应5-15min;

5.请在1h内用流式细胞仪检测,Annexin V-Light  650荧光信号通过FL4通道检测,Propidium Iodide荧光信号通过FL2或FL3通道检测;

6.每次检测需要同时检测Annexin V-Light  650单阳性管、Propidium Iodide(PI)单阳性管,用于确定荧光补偿数值及十字象限门的位置。



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